抑制剂去除对冷冻草莓中诺如病毒RT-PCR检测的影响

目的:设计对比实验,以冷冻草莓为材料,研究样品中所含抑制剂对诺如病毒荧光定量逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测结果的影响,优化提高检测灵敏度与准确率.方法:GⅡ型诺如病毒便悬液的制备与RNA提取,已知阴性冷冻草莓样品进行前处理、病毒富集、病毒RNA提取纯化,分组(对照组、实验组),抑制剂去除,荧光定量RT-PCR检测.结果:随着病毒浓度的梯度递减,抑制剂影响作用呈明显增强趋势,导致在高于正常检测最低限度两个数量级的水平,即出现假阴性结果;抑制剂去除的实验组检测结果,随着病毒浓度梯度的递减明显优于未经处理的对照组;抑制剂去除的实验组稳定检出限为10-6(Ct值小于40),最低检出限为10-7(诺如病毒(norovirus,NoV)浓度梯度检测最低检出限为10-5).结论:抑制剂去除可明显优化冷冻草莓中NoV荧光定量RT-PCR检测,提高检测方法的灵敏度,且操作简便快捷,检测成本浮动不大,期望应用于日常检测工作中.