单核细胞性李斯特菌基因dal的敲除及其生物学特性初步分析

在单核细胞性李斯特菌(Listeria monocytogenes)野生株EGDe actA及inlB双基因缺失株(EGDe△actA△inlB)的基础上,利用同源重组的方法进一步构建了缺失营养基因dal的菌株(EGDe △actA△inlB△dal),并对该缺失菌株生长状态、毒力基因表达水平、生物被膜的形成量及细胞侵袭等方面作进一步分析.结果显示,37℃摇床培养6h后,缺失株的菌浓度显著低于EGDe △actA△inlB (P＜0.001),培养基中补充D-丙氨酸的缺失株生长速率与亲本株相比无显著差异;实时荧光定量聚合酶链式反应结果显示,缺失株的sigB基因表达水平变化最明显(P＜0.01),约下调90％;缺失株生物被膜形成量显著增加(P＜0.05),培养基补充D-丙氨酸后缺失株生物被膜的生成量与亲本株相比无差异;对Coca-2细胞的侵袭无影响,表明该基因对细菌生长能力及生物被膜形成具有重要的调控作用,并不影响菌株对细胞的侵袭力.此缺失株的构建为进一步研究基因dal的功能提供了理论支持.