实时荧光PCR法鉴定食品中双歧杆菌

根据双歧杆菌属16S rRNA基因的保守区序设计特异性引物和探针，建立一种鉴定食品中双歧杆菌属的实时荧光聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）检测方法。对方法的特异性、灵敏度、重复性和体系抗干扰能力进行验证，最后采用该方法对市售25份标示含双歧杆菌样品进行检测。结果表明：该检测方法可特异性检测双歧杆菌属细菌，对近缘的乳杆菌属、链球菌属及食品中常见菌群包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌等均无扩增。双歧杆菌DNA检测绝对灵敏度可达到2 pg，相对灵敏度可达到104 CFU/mL。重复性测试表明相对标准偏差小于1%。同时进行了杂菌干扰检测实验，在培养物水平和纯基因组DNA水平上将青春双歧杆菌ATCC15703与大肠杆菌ATCC25922混合进行检测，检出Ct值较纯菌检测时无显著影响，表明建立的荧光PCR方法抗干扰能力良好。对25份市售实际样品进行测试，有5份标识含有“双歧杆菌”的样品未检测出双歧杆菌成分。本研究所建立的实时荧光PCR法能准确、快速检测食品中双歧杆菌属细菌。