响应面试验优化末水坛紫菜多糖除蛋白工艺及其抗氧化活性

目的:研究末水坛紫菜多糖的除蛋白方法及所制备多糖在细胞内的抗氧化作用.方法:响应面法优化末水坛紫菜多糖酶法除蛋白工艺条件;建立H2O2诱导HeLa细胞氧化损伤模型,MTT法测定细胞存活率,2',7'-二氯荧光素二乙酸酯检测细胞内活性氧水平.结果:样品液中末水坛紫菜多糖酶法除蛋白最佳工艺条件为木瓜蛋白酶用量0.7 mg/mL、酶解温度50℃、酶解时间55 min,此时蛋白清除率为61.28％;在此基础上,用4％三氯乙酸继续除蛋白,蛋白清除率可达80.73％,多糖保留率为79.7％.与模型组相比,经末水坛紫菜多糖处理的损伤细胞存活率显著提高(P＜0.01),且细胞内活性氧含量显著下降(P＜0.01).结论:木瓜蛋白酶-三氯乙酸联用可有效除去末水坛紫菜多糖中的蛋白.末水坛紫菜多糖有较强的抗氧化能力,能清除细胞内过剩的活性氧,修复H202对HeLa细胞的氧化损伤.