随机扩增多态性法分析西藏牦牛奶酪中乳酸菌的遗传多样性

目的:利用随机扩增多态性(randomly amplified polymorphic DNA,RAPD)法对西藏地区牦牛奶酪中27株乳酸菌基因型进行同源性分析.方法:利用5个随机引物对Mg2+浓度、dNTP用量、退火温度、模版用量/引物用量(ng/pmol)4个条件做单因素梯度试验,建立最佳反应条件,筛选最佳引物,然后对27株乳酸菌和4株乳酸菌标准菌株进行随机扩增,用NTsys 2.10e软件对扩增条带进行聚类和遗传相似性系数分析,分析结果与16S rRNA测序得到的菌种鉴定结果进行对比.结果:31株菌遗传相似系数在0.72～1.00之间,当相似性系数在0.82时,菌株被分成了8组,菌株按照不同种属聚类,聚类结果同16S rRNA测序结果基本一致,同时成功将Lactobacillus casei和Lactobacillus paracasei两个亚种区分开.结论:RAPD技术可以较好地应用于西藏地区牦牛奶酪中乳酸菌亲缘性关系分析.