Bacillus sp.L1胞外蛋白酶EL1基因克隆及酶学性质分析

目的:对菌株Bacillus sp.L1分泌的胞外蛋白酶EL1进行分离纯化、基因克隆及酶学性质研究.方法:利用硫酸铵沉淀、阴离子交换层析从菌株Bacillus sp.L1的发酵液中分离纯化出胞外酶EL1,对其进行了质谱分析、基因克隆及酶学性质研究.结果:质谱结果提示EL1属于丝氨酸蛋白酶,该酶基因开放阅读框为1326 bp,蛋白序列共441个氨基酸,氨基酸序列与菌株Bacillus stratosphericus分泌的丝氨酸蛋白酶(WP_007499449)同源性最高(98％).该酶最适温度60℃,具有较好的热稳定性;最适pH8.0,在pH8.0时稳定性较好;Mn2+对其有一定的激活作用,Cu2+对其有一定的抑制作用.结论:Bacillus sp.L1分泌的胞外蛋白酶EL1具有较好的热稳定性,在碱溶液中可以保持较高的活力,具有潜在的工业应用价值.