降解β-胡萝卜素双加氧酶的分离纯化及其部分酶学性质

研究了西方许旺酵母菌发酵产生双加氧酶的分离纯化及其酶学特性,并利用该酶降解β-胡萝卜素生成香味物质.通过摇瓶发酵,并对粗酶液进行硫酸铵梯度沉淀、半透膜透析、DEAE-Sepharose离子交换和Sephadax G-100凝胶过滤等处理,得到转化β-胡萝卜素生成香气物质的双加氧酶.实验结果表明,西方许旺酵母菌发酵产生的双加氧酶被纯化了36.43倍,酶活力回收率为21.0％,分子量为55.0 ku.酶的最适温度为40℃,最适pH为8.5;金属离子对降解β-胡萝卜素双加氧酶活力的影响为:Fe2+ ＞Mg2+ ＞K+ ＞Na+ ＞Mn2+ ＞Cu2+＞Ca2+＞Zn2+ ＞Ag+.Fe2+和Mg2+能明显增强酶活力,而Zn2和Ag+能抑制酶活力;SDS和胃酶抑素对酶活力有显著抑制作用.降解β-胡萝卜素双加氧酶的Km =8.24×10-4 mol/L,Vmax=2.16×10-4 mol/(min·mg).