制备型反相高效液相色谱分离猪股骨降血压肽的研究

猪股骨酶解液经超滤、凝胶层析、离子交换层析分离后,为了得到高活性且纯度较高的降血压肽单体,采用制备型反相高效液相色谱(RP-HPLC)对离子交换层析分离后的高活性组分进一步分离.通过对洗脱条件的优化,确定了最佳分离条件:0～5min 0％～80％A;5～8min 80％～100％A;8～15min 80％～60％A;15～20min 60％～20％A.结果显示:第一步RP-HPLC分离得到三个组分,其中峰Z2的活性最高,其IC50值为0.0437mg/mL;组分Z2进行第二步RP-HPLC分离,其峰Z21的IC50值达到0.0352mg/mL,其纯度达到96.7％.通过分析Z21的氨基酸组成以及LC-MS的分离鉴定,确定其含有6种氨基酸(Glu、Ala、Val、Leu、Phe、Pro),其分子量为764.8.