猪链球菌微滴数字PCR定量检测方法的建立

根据猪链球菌(Streptococcus suis,SS)gdh基因的保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,通过反应条件优化和特异性、敏感性、重复性试验以及临床样品的检测,建立可对其准确定量的微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)检测方法,并与实时荧光定量PCR(Quantitativereal-time PCR,qPCR)检测方法进行比较分析.结果表明,该方法特异性良好,与猪传染性胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、猪圆环病毒2型和伪狂犬病毒无交叉反应;灵敏度优于qPCR,线性相关系数(R2)为0.991,呈良好线性关系,最低可检测到2.692 copies/μL的阳性质粒;稳定性好,变异系数为1.66％.临床样品定量检测结果表明,ddPCR具有敏感性高、特异性好等优点,能对qPCR检测的可疑样品进行精确定量.本研究建立的ddPCR能够准确定量检测SS,将为SS相关研究提供有益参考.