胰蛋白酶激活条件优化及其在细胞培养中的应用

基于猪胰脏提取胰蛋白酶,以酶活力为衡量指标,在单因素试验的基础上通过正交试验探讨了胰蛋白酶原的激活条件,并通过离子交换层析纯化胰蛋白酶,最后探讨胰蛋白酶对BHK-21和Vero两种贴壁依赖性细胞的消化效果.结果表明,胰蛋白酶原最佳的激活条件为:激活剂浓度0.2 mol/L,pH 8.5,16℃下激活1.5 h,酶活力达到2 953.68 U/mg.通过DEAE sepharose FF纯化后其酶活力达到3 980.42 U/mg,纯化倍数达到2.26;细胞消化结果表明,用其消化BHK-21细胞和Vero细胞并连续10代,平均消化时间和细胞增殖浓度与Hyclone和Gibco产品没有明显的差异(p＞0.05),每代细胞形态良好,生长正常.该工艺简单,激活耗时短,易于产业化,为胰蛋白酶的国产化和进一步研究奠定理论依据.