培养基添加剂促进重组大肠杆菌胞外分泌β-环糊精葡萄糖基转移酶的工艺优化

随着对p-环糊精的需求的增加,开发提高β-环糊精葡萄糖基转移酶产量成为主要焦点之一.为了克服重组质粒pET28a-DacD-cgt-his胞外产酶量低的缺陷,研究了培养基添加剂对β-环糊精葡萄糖基转移酶胞外分泌的影响,提高胞外表达量.首先通过向培养基中分别添加表面活性剂(Tween-80、Triton X-100)、氨基酸(天冬氨酸、甘氨酸)、渗透调节剂(L-脯氨酸、山梨醇、甜菜碱)和环糊精(α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精)4种类型添加剂以确定对重组大肠杆菌胞外分泌p-环糊精葡萄糖基转移酶的有益添加剂;其次对Tween-80、Triton X-100、甘氨酸和L-脯氨酸进行单因素试验和正交试验以确定培养基添加剂的组合条件.结果 表明,各因素对胞外产β-环糊精葡萄糖基转移酶的影响顺序依次是:Tween-80＞Triton X-100＞甘氨酸＞L-脯氨酸;培养基添加剂促进胞外分泌β-环糊精葡萄糖基转移酶的最优组合是:Triton X-100 0.5％、Tween-80 2％、甘氨酸30 mmol/L、L-脯氨酸80 mmol/L,胞外产酶量达50.3 U/mL,是对照组的2.04倍.