冬凌草甲素对2型糖尿病大鼠肾脏Toll样受体4介导免疫炎症信号通路的干预研究

目的 观察冬凌草甲素(oridonin,Ori)对2型糖尿病大鼠肾脏Toll样受体4(TLR-4)介导免疫炎症信号通路的影响,探讨其对糖尿病肾病的干预作用及可能机制.方法 体内实验:选用8周龄、体重180～220 g雄性SD大鼠32只,按随机数字表法分为正常对照组(NC组)、正常对照+Ori组(NCO组)、糖尿病组(DM组)、糖尿病+Ori组(DMO组),每组8只.体外实验:高糖(HG)培养大鼠肾小球系膜细胞,以TLR-4抑制剂TAK-242及Ori进行干预.NCO组和DMO组大鼠腹腔注射Ori 10 mg· kg-1·d-1,干预8周.检测各组大鼠生化指标,光镜下观察肾组织病理学改变.免疫组化检测肾组织TLR-4和巨噬细胞(CD68阳性细胞)表达;免疫荧光分析肾组织CD4+、CD8+T细胞表达;ELISA法检测肾组织和细胞上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β水平;Western blot法检测肾组织和细胞TLR-4、核因子-κappa B(NF-κB)蛋白表达.各组间比较采用单因素方差分析.结果 (1)与NC组相比,DM组大鼠肾小球和肾小管间质CD68阳性细胞明显浸润(t=11.56、13.69,均P＜0.05);与DM组相比,DMO组CD6s阳性细胞表达减少(1.87±0.25比2.93±0.31、0.27±0.04比0.65±0.07,t=8.58、15.54,均P＜0.05).(2)与NC组相比,DM组大鼠肾组织TNF-α、IL-6、IL-1β水平明显升高(分别为t=11.01～19.79,均P＜0.05),而DMO组大鼠肾组织TNF-α、IL-6、IL-1β的水平较DM组显著减少(分别为t=11.72～17.18,均P＜0.05).(3)与DM组相比,DMO组大鼠肾组织TLR-4蛋白表达明显被抑制(0.28±0.06比0.55±0.12,t=7.89,P＜0.05);与HG组(0.79±0.12)相比,高糖状态下给予Ori和TAK-242干预后细胞TLR-4蛋白表达明显减少(分别为0.49±0.05、0.42±0.10,t=9.13、9.63,均P＜0.05).(4)与DM组相比,DMO组肾组织p65蛋白表达水平明显降低(t=5.90,P＜0.05).与HG组相比,高糖状态下给予Ori和TAK-242干预后,细胞p65和IκBα磷酸化水平均显著减少(均P＜0.05).结论 Ori可能通过抑制TLR-4/NF-κB介导的炎症信号,减少炎症细胞浸润和炎症因子表达,从而减轻糖尿病肾脏损害.