胰淀素受体在大鼠胰岛β细胞中的表达及其参与胰淀素细胞毒作用的研究

目的：鉴定三种胰淀素受体在大鼠胰岛β细胞中的表达，探讨其在人胰淀素对β细胞的毒性作用中的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应，免疫荧光方法检测大鼠胰岛素瘤细胞系INS-1和正常大鼠胰岛β细胞中胰淀素受体表达。人胰淀素孵育INS-1细胞24 h，实时定量逆转录聚合酶链反应及免疫荧光法检测胰淀素孵育对受体活性修饰蛋白（RAMP）mRNA转录及细胞表面表达的影响。在细胞毒性试验中，首先用胰淀素、胰淀素受体拮抗剂AC253单独或二者联合孵育INS-1细胞24～48 h，再用不同浓度RAMP1抗体与胰淀素联合孵育24 h，检测细胞存活率变化。组间数据比较采用t检验。结果逆转录聚合酶链反应、免疫荧光染色均证实三种胰淀素受体在大鼠胰岛β细胞中的表达。胰淀素孵育24 h使INS-1细胞RAMP2和RAMP3的mRNA分别下降至0.77±0.10（t=2.546，P<0.05）和0.66±0.09（t=4.559，P<0.05），而RAMP1的mRNA有轻度升高趋势，升至1.25±0.17（t=-3.084， P<0.05），并且RAMP1在细胞表面分布增加。细胞毒性实验中，人胰淀素孵育24 h组细胞存活率为70%±13%，较对照组（100%±14%）明显下降（t=4.409，P<0.05），胰淀素受体拮抗剂AC253与人胰淀素同时作用24 h组细胞存活率为94%±16%，较胰淀素单独孵育24 h组明显升高（t=-3.341，P<0.05）。但对胰淀素作用48 h诱导的细胞死亡未有明显缓解。RAMP1受体在1∶500和1∶1000稀释度下与人胰淀素同时孵育24 h组的细胞存活率分别为94%±12%和96%±11%，较胰淀素单独作用组也有明显升高（t=-4.904、-5.565，P<0.05），也可抑制人胰淀素的毒性作用，而同型IgG对人胰淀素作用无影响。结论本研究证实了三种胰淀素受体均在大鼠胰岛β细胞中表达，并发现胰淀素受体尤其是RAMP1蛋白可能参与人胰淀素对β细胞的毒性作用。