固醇调节元件结合蛋白1c激活大鼠Patatin样磷酯酶结构域蛋白3基因转录

目的 探讨固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)对Patatin样磷酯酶结构域蛋白3(PNPLA3)基因的转录调控作用.方法 构建7周龄雄性体重匹配的禁食(24 h)以及禁食后再喂食(48 h)SD大鼠(自由饮食组3只,饥饿组3只,再喂食组4只)和高脂及小剂量链脲佐菌素诱导的2型糖尿病SD大鼠(正常对照组5只,2型糖尿病组6只).用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blotting法检测各组大鼠肝脏组织中SREBP-1 c和PNPLA3的表达水平.将大鼠PNPLA3启动子5 '端上游-1000 bp序列分成3段,分别构建荧光素酶报告载体(R-PNPLA3-1、R-PNPLA3-2、R-PNPLA3-3),转染人正常肝细胞株LO2,比较3个载体基础荧光素酶活性以及SREBP-1c过表达诱导的荧光素酶活性.分析上述实验中荧光素酶活性最高的PNPLA3启动子片段可能的SREBP-1 c结合位点(SRE),分别构建野生型和SRE突变型报告载体,比较两个载体荧光素酶活性.多组定量资料比较用方差分析,两组定量资料比较用t检验.结果 与自由饮食组相比,饥饿组大鼠肝脏SREBP-1c、PNPLA3和脂肪酸合成酶FAS基因表达均下降,再喂食组三者表达显著升高,差异均有统计学意义(F=114.14,334.11,754.20,均P＜0.05).与正常对照组相比,2型糖尿病组SREBP-1c、PNPLA3基因(t=-18.39,-30.07,均P＜0.05)及蛋白表达(t=4.58,6.81,均P＜0.05)均显著增高.R-PNPLA3-1报告载体基础荧光素酶活性较对照升高51.13倍(t=-28.93,P＜0.05),R-PNPLA3-2和R-PNPLA3-3无基础荧光素酶活性；在LO2细胞中,转染SREBP-1c表达质粒的R-PNPLA3-1组荧光比值较转染空质粒的组升高2.63倍(t=-7.64,P＜0.05),而R-PNPLA3-2组及R-PNPLA3-3组转染SREBP-1c表达质粒荧光比值较转染空质粒组均无变化；PNPLA3启动子-100～-91 bp存在SRE,SRE突变的报告载体(MUT-R-PNPLA3-1)荧光比值较野生型(R-PNPLA3-1)降低40.80％(=4.99,P＜0.05).结论 SREBP-1c通过PNPLA3基因启动子-100～-91 bp激活大鼠PNPLA3基因转录.