叉头状转录因子O1对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞氧化应激的影响

目的 通过激活和抑制叉头状转录因子O1 (FoxO1)活性及表达,探讨其对高糖培养下大鼠肾小球系膜细胞(MCs)氧化应激的作用.方法 采用脂质体转染法将FoxO1短发夹样RNA(FoxO1 shRNA)质粒载体稳定转染MCs;用高糖(30.0 mmol/L)和白藜芦醇(Resv 20.0 μmol/L)培养稳定转染后的MCs.以5.6 mmol/L葡萄糖培养的MCs为正常对照组(NG),将高糖培养的MCs分为5组:单纯高糖组(HG)、HG+ Resv组、HG+ FoxO1 shRNA转染组、HG+ Resv+ FoxO1 shRNA转染组、HG+转染阴性对照组(shNC).培养72 h后,用荧光酶标仪检测各组MCs内活性氧(ROS)水平;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测去乙酰化酶(Sirtl)、FoxO1、锰超氧化物歧化酶(MnSOD) mRNA表达；Western blotting法检测FoxO1及磷酸化FoxO1 (p-FoxO1)水平.多组间数据比较采用单因素方差分析.结果 与NG组相比,HG组Sirtl mRNA表达下降,p-FoxO1水平升高,MnSOD mRNA表达下降,ROS水平升高,差异均有统计学意义(t=12.38、13.27、14.13、8.36,均P＜0.05).与HG组相比,HG+ FoxOlshRNA转染组FoxO1mRNA表达被抑制,MnSOD mRNA表达更低,ROS水平更高,差异均有统计学意义(t =20.61、13.61、10.13,均P＜0.05)；HG+ Resv组Sirtl mRNA表达升高,p-FoxOl水平下降,MnSOD mRNA表达升高,ROS水平下降,差异均有统计学意义(t=6.02、10.69、5.39、5.37,均P ＜0.05).与HG+ Resv组比较,HG+ Resv+ FoxO1shRNA转染组,FoxO1mRNA表达被抑制,MnSOD mRNA表达降低,ROS水平升高,差异均有统计学意义(t=22.53、15.31、14.63,均P＜0.05).结论 FoxO1是调节MCs内ROS水平的重要转录因子,其可能通过激活下游抗氧化靶基因MnSOD的表达,保护MCs对抗氧化应激.