构建两种启动子调控的自杀基因介导的肝癌细胞治疗

目的：将外源基因 pSurvivin-HSV-TK 导入质粒 PBI-CMV2中，将外源基因pAFP-HSV-TK导入质粒PBI-CMV2中，构建两种特异性表达的质粒，比较两种启动子调停的优越性。方法由阳离子脂质体 lipofectamine2000TM，运载两种质粒转染肝癌细胞 HuH-7，流式细胞术测定转染效率，半定量PCR检测TK基因在肝癌细胞中的表达水平。转染肝癌细胞HuH-7，联合更昔洛韦杀伤细胞，流式细胞术检测细胞凋亡率，CCK-8检测加药（GCV）后细胞的增殖情况。结果阳离子脂质体lipofectamine2000TM介导Survivin-TK-pBI-CMV2质粒转染的HuH-7细胞的转染率与介导AFP-TK-pBI-CMV2质粒转染的 HuH-7细胞的转染率分别为（14.43±0.88）%和（12.51±1.74）%（P=0.38），无统计学差异。半定量 PCR 检测 HSVtk 在转染的 HuH-7细胞中有表达，且转染Survivin-TK-pBI-CMV2质粒的细胞中 TK 基因的表达更高（P=0.001），在未转染细胞内未检测到表达。细胞凋亡实验表明GCV对转染的HuH-7细胞有显著的杀伤作用，且转染Survivin-TK- pBI-CMV2质粒的HuH-7细胞凋亡作用更明显（P=0.001）。结论肝细胞靶向基因运输载体PBI-CMV2介导的由AFP和Survivin启动子调控的HSVtk/GCV自杀基因系统对HuH-7肝癌细胞均具有显著杀伤作用，且Survivin启动子调控作用相对明显，这为肝癌的靶向基因治疗策略的发展提供了新思路。