表达TIPE2腺病毒载体的构建及其对结肠癌细胞增殖的影响

目的：结肠癌的发生与结肠慢性炎症密切相关。TIPE2（tumor necrosis factor-α-induced protein 8-like 2）是一种炎症和免疫平衡的调节因子。本实验旨在构建表达TIPE2的腺病毒载体，并初步观察其对结肠癌细胞增殖的影响。方法将TIPE2-cDNA定向克隆至转移质粒pShuttle-CMV多克隆位点，然后与病毒骨架质粒 pAdc68重组，在 HEK293细胞中包装成完整病毒并复制扩增、纯化，获得表达TIPE2的重组腺病毒载体，命名为Adc68-TIPE2。实时荧光定量PCR及Western blot检测病毒感染后TIPE2在结肠癌细胞系HT29及SW620中的表达，MTT法检测TIPE2对结肠癌细胞增殖的影响。结果重组腺病毒载体Adc68-TIPE2构建成功。病毒感染后TIPE2可在结肠癌细胞系HT29及SW620中高效表达。以不同浓度Adc68-TIPE2（分别为108 vp/ml、109 vp/ml、1010 vp/ml）感染HT29及SW620细胞48 h后，HT29细胞的增殖率分别为93%、71%、14%。与空载体相比差异有统计学意义（P＜0.05）；SW620增殖率分别为89%、53%、10%。与空载体相比差异有统计学意义（P＜0.05）。结论本研究成功构建表达TIPE2的腺病毒载体Adc68-TIPE2，Adc68-TIPE2可抑制结肠癌细胞增殖。