花生四烯乙醇胺对血小板相关凋亡蛋白的影响

目的：在血站标准存储血小板条件下，探讨花生四烯乙醇胺（N-Arachidonoylethanolamine， ANA）对血小板细胞相关凋亡的影响。方法利用 Amicus 血细胞分离机从无偿献血志愿者采集血小板，向其中一组加入终浓度为0.5μmol/L的ANA为ANA组，未加入ANA的另一组作为对照组，置于（22±2）℃水平振荡的振荡仪保存7 d。采用流式细胞仪检测血小板磷脂酰丝氨酸（PS）膜外表达；ELISA检测可溶性P-选择素的释放，Western blot检测血小板caspase-3和caspase-9的表达以及免疫共沉淀分析 BCL-XL 和 Bak 蛋白相互作用。结果 ANA 组 PS 表达阳性率显著低于对照组[（8.29±1.44）% vs.（14.24±2.47）%，P＜0.05]；ANA 组可溶性 P-选择素含量显著低于对照组[（75.08±6.35）ng/ml vs.（90.37±8.91）ng/ml，P＜0.05]；ANA 组BCL-XL和Bak蛋白的结合量显著高于对照组，约为对照组的2.6倍（P＜0.05）；ANA 组caspase-9活性形式的量占总量（包括caspase-9酶原形式和活性形式）的百分比显著低于对照组[（9.63±1.47）%vs.（23.24±2.47）%]；ANA 组caspase-3活性形式的量占总量（包括caspase-3酶原形式和活性形式）的百分比显著低于对照组[（6.3±1.4）%vs.（13.2±2.5）%]，两组相比差异均具有统计学意义。结论 ANA促进BCL-XL和Bak蛋白的结合，抑制了caspase-3和caspase-9的活化，在一定程度上抑制血小板凋亡。