microRNA 在柯萨奇 B3病毒诱导的心肌微血管内皮细胞凋亡中的差异表达

目的：本研究通过体外培养心脏微血管内皮细胞（CMVECs），经柯萨奇 B3病毒（CVB3）感染后，利用miRNA寡核苷酸基因芯片技术筛选差异表达的miRNAs，进一步探讨miRNA在 CVB3诱导 CMVECs 凋亡中的潜在作用机制。方法原代分离培养大鼠 CMVECs 细胞，以100TCID50CVB3病毒感染48 h 后检测Caspase-3活性和细胞凋亡；提取CMVECs细胞RNA，用Agilent大鼠miRNA寡核苷酸基因芯片进行检测，并通过TargetScan、miranda、mirbase和mirdb数据库选取出差异表达明显并与心血管疾病相关的miRNA，经qPCR对其进行验证，通过生物信息学分析预测其调控靶基因；合成miRNA21 mimics转染CMVECs细胞，同时合成miRNA21 inhibitor，与 CVB3共转染 CMVECs 细胞，检测各组细胞 Caspase-3活性变化和细胞凋亡。结果 CVB3感染CMVECs细胞48 h后与正常对照组比较Caspase-3活性显著上调（P＜0.01），细胞凋亡明显增加；通过基因芯片检测及生物信息学分析后发现，与心血管系统疾病密切相关的miRNA为miRNA21，经qPCR验证结果一致，预测其靶基因为PDCD4；miRNA21mimics转染CMVECs细胞后与正常对照组相比Caspase-3活性显著上调，细胞凋亡增加（P＜0.05）；而miRNA21 inhibitor与CVB3共转染 CMVECs 细胞后与 CVB3感染组相比 Caspase-3活性显著下调，细胞凋亡明显减少（P＜0.05）。结论 miRNA21在CVB3感染的CMVECs细胞中的表达有显著变化，并与CMVECs细胞凋亡密切相关，提示miRNA21在CVB3诱导的病毒性心肌炎发病过程中可能起着重要作用。