重组蓖麻毒素A链的原核表达和单克隆抗体的制备、鉴定及蓖麻毒素侦检方法的建立

目的 实现重组蓖麻毒素A链(rRTA)的高效、可溶性表达,构建rRTA的单克隆抗体杂交瘤细胞系,获得并纯化rRTA的单克隆抗体,建立基于RTA单抗的蓖麻毒素现场侦检方法.方法 用计算机辅助设计的RNA二级结构预测和偏性密码子等手段设计引物;用PCR将rRTA基因克隆至载体pET32a(+);用双酶切和DNA测序技术对构建的载体进行鉴定;IPTG诱导rRTA原核表达载体pET32a(+)/rRA/BL21,用镍离子亲和层析纯化,ELISA及Western blot鉴定rRTA蛋白;rRTA免疫Balb/c小鼠,建立杂交瘤细胞株,获得抗rRTA的单克隆抗体,用Western Blot鉴定.结果 构建了rRTA原核表达载体pET32a(+)/rRA/BL21,实现了rRTA在大肠杆菌BL21中的高效、可溶性表达,获得了高纯度约10-20 mg/LrRTA;获得了抗rRTA的单克隆抗体;建立了ricin ELISA检测方法,此方法检出ricin的最低浓度为3.125 ng/m L,目视比色对蓖麻毒素的最低检出浓度为6.25 ng/mL.结论 本研究表达的rRTA及其单克隆抗体和基于单抗的ricin检测方法,将在肿瘤生物治疗、ricin生物恐怖袭击的侦检、治疗和预防中发挥重要作用.