两种烟碱对映体与胃蛋白酶作用机理的研究
Journal of Sichuan University(Engineering Science Edition)(2020)
Abstract
利用分子荧光光谱法、紫外可见吸收光谱法结合分子模拟对接技术,重点围绕烟碱(NIC)两种对映体S-NIC和R-NIC对胃蛋白酶(PEP)的荧光猝灭机理、结合常数、结合模式及对酶的活性和二级结构的影响等展开了研究.Stern-Volmer方程拟合结果显示,S-NIC和R-NIC两种对映体与PEP作用时的猝灭常数(Ksv)均随温度的增大而增加,表明二者均通过动态猝灭方式使PEP的内源性荧光强度降低,R-NIC对PEP荧光的猝灭能力明显比S-NIC强,此结果得到紫外可见吸收光谱实验的进一步验证.有效结合常数(Ka)分析可知,R-NIC与PEP的结合明显优于S-NIC.由Arrhenius方程求得S-NIC和R-NIC两种对映体与PEP相互作用的活化能(Ea)分别是12.67 kJ/mol和2.65 kJ/mol,表明R-NIC与PEP碰撞结合更强烈,疏水作用力在此过程中均起主要作用.同步和3维荧光结果表明,NIC两种对映体均诱导PEP的微环境和构象发生部分变化.酶活性研究发现,PEP活性随S-NIC及R-NIC浓度的增加而逐渐降低,相同浓度下R-NIC的抑制比S-NIC更为显著.分子对接结果是:两种对映体在PEP分子中具有相同的结合位点,二者均结合在蛋白分子N端和C端之间的沟槽内.
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