稳定表达猪Viperin的PK-15细胞系的构建与鉴定

为了探讨先天免疫效应因子Viperin的抗病毒作用，从猪外周血单核细胞中成功扩增了猪Viperin基因完整阅读框，克隆到真核表达载体pEGFP?C1中构建重组表达质粒pEGFP?Vi。阳性质粒经PCR、酶切和测序鉴定后通过脂质体Lipofectamine 2000介导转染PK?15细胞，荧光显微镜观察发现融合蛋白质EGFP?Viperin定位于细胞质中，不同于对照质粒EGFP在细胞中的均匀分布。共聚焦检测结果表明，重组蛋白质主要定位于细胞的内质网上。 Western blot检测结果表明，猪 Viperin蛋白质在 PK?15细胞中以融合蛋白质的形式稳定表达，分子量约为7．0×104。