低温驯化下斑马鱼LINE1的表达检测

长散布核元件-1 (Long spread nuclear element-1,LINE1)是跳跃基因.前期比较基因组研究发现,南极鱼经历漫长的低温适应进化后,与南极圈外的同亚目鱼类相比较,在基因水平上LINE1的扩增效率高达8～300倍,但LINE1的扩增与鱼类抵御寒冷之间的关系尚未明了.本实验对斑马鱼(Danio rerio)胚胎成纤维细胞ZF4进行了不同时间梯度的低温处理(18℃、5d和18℃、30 d),同时对斑马鱼成鱼也进行了不同时间的低温处理(10℃,3h、6h、1d、3d、5d).采用RT-qPCR检测了LINE1的mRNA水平,并克隆了斑马鱼LINE1基因启动子区,利用Luciferase双荧光报告系统,在ZF4细胞中验证LINE1 5'UTR在低温压力下的生物活性.结果 显示,短时间低温处理下,ZF4细胞中LINE1 mRNA水平有所降低,而在长时间低温处理中,LINE1的mRNA水平显著升高.在成鱼中,短时间低温处理下,LINE1 mRNA水平降低;长期低温处理下,LINE1 mRNA水平显著升高.在ZF4细胞中发现,LINE1 5'UTR具有生物活性.在低温处理(18℃,3d)下,报告基因信号减弱,间接表明LINE1启动子活性减弱.研究结果表明,低温压力会影响LINE1在鱼类中的表达.本研究为进一步探究LINE1在鱼类适应低温环境中的作用机制奠定了基础.