鸡包涵体肝炎病毒荧光定量PCR滴度测定方法的建立及与不同滴定方法间的比较

本试验根据GenBank中Ⅰ群禽腺病毒(FAV-Ⅰ)代表株AAU46933(CELO株)的Hexon基因序列设计一对通用引物,摸索了合适的扩增条件,建立了SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,并对9株鸡包涵体肝炎毒株的病毒滴度进行了测定,并与OD260法、鸡胚病变法以及细胞病变法测定的结果进行比较.试验结果表明,本方法的检测下限为0.98×102拷贝/μL.以细胞病变法为标准测定方法,经统计学分析发现,鸡胚病变法与细胞病变法之间无统计学差异(P=0.591);荧光定量PCR法与细胞病变法测得结果之间存在线性相关性(相关系数r=0.965,P＜0.05);OD260法与细胞病变法测得的结果间无相关性(P＞0.05).以上结果说明,荧光定量PCR法测定结果能够间接反映病毒感染力,与传统方法相比,该方法操作简单、耗时短、成本低,具有较高的应用价值.