柔嫩艾美耳球虫顶膜抗原-1潜在子孢子互作蛋白的筛选

为了筛选与柔嫩艾美耳球虫顶膜抗原-1(Eimeria tenella apical membrance antigen 1,EtAMA1)存在互作的子孢子蛋白,以柔嫩艾美耳球虫子孢子cDNA为模板,PCR扩增EtAMA1基因胞外区,将扩增产物与pGEX-6P-1连接,构建原核表达质粒pGEX-6P-1-EtAMA1,表达、纯化重组蛋白EtAMA1-GST.纯化的重组蛋白经Western blot验证,结果显示在75 kDa处有单一的目的条带,证实了所获得的蛋白为EtAMA1-GST融合蛋白.将EtAMA1-GST蛋白、GST蛋白和PBS分别与谷胱甘肽琼脂糖珠孵育后,再分别与子孢子裂解物共孵育,洗脱液经SDS-PAGE分析后,结果显示三者之间的条带明显不同.将差异条带切下进行质谱分析,对获得的蛋白质肽段与Uniprot中鸡球虫蛋白质数据库进行Blast比对,初步获得了10个与EtAMA1存在潜在互作的柔嫩艾美耳球虫子孢子蛋白,包括微线体蛋白、糖酵解酶类、肌动蛋白相关因子以及一些保守蛋白等,他们广泛参与了虫体的入侵、发育、能量代谢等生物学过程.研究结果为进一步阐明EtAMA1在球虫入侵宿主细胞中发挥重要作用的分子机制奠定了基础.