猪瘟病毒NS2、NS3和NS5A与猪Rab25蛋白的亚细胞定位分析

为了研究NS5A与Rab25的亚细胞定位及作用基因区段,先构建pDsRed1-N1-Rab25红光载体,利用经过改造并加GFP的pcDNA3.1 (+)-NS2、pcDNA3.1(+)-NS3和pcDNA3.1 (+)-NS5A载体,将pDsRedN1-Rab25红光载体与这3种绿光载体分别共转染于猪血管内皮细胞(SUVEC),通过共聚焦显微镜观察显示Rab25和NS2、NS3共定位现象不明显而与NS5A存在着明显共定位.为了进一步研究NS5A与Rab25作用基因区段,构建NS5A的3个分段基因载体:pEGFP-C1-NS5A-1-84、pEGFP-C1-NS5A-84-804和pEGFP-C1-NS5A-804-1 491,转染SUVEC并观察共定位情况,结果显示Rab25与NS5A的804～1 491 bp存在明显共定位,而与1～84,84～804 bp的共定位现象不明显.结果 说明Rab25与NS5A基因的804～1 491 bp存在共定位,这为继续研究Rab25与NS5A的关键作用位点及互作奠定基础.