加味宫外孕II号方对人滋养叶细胞Caspase-12通路影响的研究

目的 观察加味宫外孕II号方对人滋养叶细胞内质网应激Caspase-12信号通路凋亡相关蛋白Caspase-7、Caspase-9、Caspase-3水平的影响及细胞超微结构变化,探讨其治疗异位妊娠的作用机制.方法 将SD大鼠分为阴性对照组(B组)、低、中、高剂量中药组(C组、D组、E组)、甲氨蝶呤组(F组)、中西药结合组(G组),予相应药物处理后取血制备含药血清,将各组含药血清分别作用于HTR-8/SVneo细胞24 h,并设置未用含药血清处理的细胞作为空白对照组(A组).采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)与实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测HTR-8/SVneo细胞中凋亡基因Caspase-7、Caspase-9、Caspase-3蛋白及mRNA的表达水平;采用透射电镜观察细胞超微结构的变化.结果 (1)Caspase-7、Caspase-9、Caspase-3蛋白水平及mRNA相对表达量:A组与B组比较无差异(P>0.05);与B组比较,C组Caspase-7 mRNA、Caspase-9蛋白及Caspase-3蛋白与mRNA表达均上调明显(P<0.05),而Caspase-7蛋白、Caspase-9 mRNA表达无差异(P>0.05);D、E、F、G组Caspase-7、Caspase-9、Caspase-3蛋白及mRNA表达量均较B组明显上调(P<0.05);E组较D组上调明显(P<0.05);E组与F组比较,Caspase-7、Caspase-9蛋白与mRNA及Caspase-3蛋白表达上调明显(P<0.05);E组与G组比较,Caspase-9蛋白与mRNA及Caspase-3蛋白表达上调明显(P<0.05);F组与G组比较无差异(P>0.05).(2)透射电镜结果显示:A组与B组细胞染色质均匀散布于核膜内,细胞内质网、线粒体、高尔基体清晰可见;与B组比较,C、D、E、F、G组细胞微绒毛减少,染色质固缩,异染色质边缘化,部分线粒体肿胀、脊紊乱或断裂、甚至消失,线粒体空泡化等典型的凋亡特征改变.结论 加味宫外孕II号方可能通过激活内质网应激Caspase-12信号通路,破坏滋养叶细胞的形态学结构,上调Caspase-7、Caspase-9、Caspase-3凋亡相关基因的表达,促进滋养叶细胞凋亡.