MicroRNA-133b-5p通过靶向调控Fas基因影响H9c2心肌细胞凋亡

目的 研究microRNA(miR)-133b-5p在H9c2心肌细胞凋亡中发挥的作用及其靶向调控Fas基因的机制.方法 取对数生长期大鼠H9c2胚胎心肌细胞,分为空白对照组、miR-133b-5p抑制剂组、抑制剂阴性对照组.分别转染48 h后收集细胞,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-133b-5p表达,微板法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,Annexin V-FITC联合PI双染流式细胞术检测细胞凋亡.双荧光素酶报告基因系统验证miR-133b-5p与Fas mRNA的3'UTR区的靶向结合.最后运用qRT-PCR和Western blot分别检测各组Fas mRNA与Fas蛋白表达水平.结果 miR-133b-5p抑制剂组细胞内miR-133b-5p表达水平下调至空白对照组的33％(P＜0.05);LDH活性升高,细胞凋亡率增加,均明显高于空白对照组与抑制剂阴性对照组(P＜0.05).双荧光素酶报告基因证明Fas是miR-133b-5p的一个靶基因;miR-133b-5p inhibitor显著上调Fas mRNA和Fas 蛋白水平(P＜0.05).结论 利用化学合成miR-133b-5pinhibitor抑制大鼠H9e2心肌细胞中miR-133b-5p表达,可诱导心肌细胞损伤和凋亡,其机制可能与调控靶基因Fas表达有关.