转化生长因子-β2(TGF-β2)诱导人视网膜色素上皮层细胞上皮-间质转分化中miRNA-29b的表达及意义

目的 探究转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)诱导人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)层细胞上皮-间质转分化中miRNA-29b的表达变化及意义.方法 使用不同浓度TGF-β2刺激RPE细胞上皮-间质转分化后,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,Western blot、RT-PCR检测成纤维化相关分子纤维连接蛋白(fibronection,FN)、神经钙粘连蛋白(nerve calcium adhesion protein,N-Cadherin)的表达.采用RT-PCR检测不同浓度TGF-β2及不同时间TGF-β2(5μg·L-1)刺激RPE细胞后miRNA-29b的表达.结果 TGF-β2刺激后的RPE细胞形态呈纤维化改变.在一定浓度范围内(1μg·L-1、5μg·L-1、10 μg· L-1),随着TGF-β2浓度的增加FN、N-Cadherin及相应mRNA随之增加,1μg·L-1、5μg·L-1、10μg · L-1组与对照组(0 μg· L-1)相比,差异均有统计学意义(均为P＜0.01).TGF-β2在一定浓度范围内(0μg· L-1、1μg·L-1、5 μg· L-1)以剂量依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b表达的降低,1μg·L-1、5μg·L-1、10μg·L-1组与对照组(0μg·L-1)相比,差异均有统计学意义(均为P＜0.01),在TGF-β2浓度为5μg·L-1时miRNA-29b表达量最低.TGF-β2在一定时间范围内(0h、3h、6h、12 h)以时间依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b表达的降低,3h、6h、12 h、24 h、48 h组与0h相比差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 一定范围内TGF-β2以剂量和时间依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b的表达,为进一步研究miRNA-29b与TGF-β2在RPE细胞上皮-间质转分化过程中的相互作用提供理论基础.