载自杀基因的叶酸靶向肝癌相变纳米粒的制备及鉴定
Tumor(2020)
Abstract
目的:制备载有单纯疱疹病毒Ⅰ型(herpes simplex virus type Ⅰ,HSV1)-胸苷激酶(thymidine kinase,TK)自杀基因和全氟戊烷(perfluoropentane,PFP)的叶酸(folic acid,FA)靶向聚乳酸-乙醇酸[poly (lactic-co-glycolic acid),PLGA]相变纳米粒(命名为FA-PLGA/PFP-TK),并鉴定其寻靶、增强超声显像和抑制肝癌细胞增殖的功能.方法:采用双乳化法和碳二亚胺法制备FA-PLGA/PFP-TK纳米粒,使用Malvern激光粒径仪检测该纳米粒的粒径和电位,用光学及电子显微镜观察纳米粒相变形态.以人肝癌SMMC-7721细胞验证该纳米粒的寻靶能力,用低强度聚焦超声(low intensity focused ultrasound,LIFU)辐照后观察超声增强显像和基因转染效果,采用蛋白质印迹法检测TK蛋白表达情况,采用CCK-8法检测肝癌细胞存活率.结果:制备的纳米粒粒径为(207.00±46.06) nm,相变形态呈规则球形,TK基因包封率为(34.95±3.14)%.体外寻靶实验显示FA-PLGA/PFP-TK纳米粒靶向聚集于肝癌细胞周围.经LIFU辐照后超声显像明显增强,且靶向FA组的TK蛋白表达水平明显增高,肝癌细胞存活率明显降低(P值均<0.01).结论:FA-PLGA/PFP-TK靶向纳米粒被成功制备,有望实现超声成像引导下的基因靶向肝癌治疗.
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