程序性死亡分子1/程序性死亡分子1配体信号通路在肺癌细胞株上的表达及其生物学意义
Chinese Journal of Experimental Surgery(2016)
Abstract
目的 观察程序性死亡分子1配体(PD-L1)在肺癌细胞株上的表达及其对T细胞杀伤效应的调节作用.方法 取对数生长期的肺癌H1299、A549细胞与抗人PD-L1单克隆抗体及相应的同型对照IgG共孵育,经流式细胞仪(FCM)检测细胞表面PD-L1分子的表达.采用常规方法从健康人外周血单个核细胞诱导树突状细胞(DCs),并经凋亡肿瘤细胞和激发型CD40单克隆抗体刺激获得成熟DCs,与自体T细胞共孵育后获得肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL);FCM检测肺癌细胞上PD-L1分子的表达;人连接附着分子(JAM)法和单克隆抗体阻断实验分析CTL细胞对肺癌细胞株的杀伤效应,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞培养上清中干扰素(IFN)-γ的含量.结果(1)经凋亡肿瘤细胞负载的成熟DCs可诱导自体T细胞分化为肿瘤特异性CTL;(2)H1299细胞高表达PD-L1分子,表达率为(91.1±7.8)%,而A549细胞低表达PD-L1分子,表达率仅为(20.6±2.4)%,两组比较差异有统计学意义(P<0.01).(3)CTL能有效杀伤A549细胞,联合PD-L1单克隆抗体并不能进一步促进CTL对A549细胞的杀伤效应.单独CTL组和CTL联合PD-L1单克隆抗体组的DNA片段形成率分别为(81.1±8.9)%、(83.3±9.4)%,两组比较差异无统计学意义(t=0.048,P>0.05).单独CTL不能有效杀伤H1299细胞,但联合PD-L1单克隆抗体可有效促进CTL对H1299细胞的杀伤效应.单独CTL组和CTL联合PD-L1单克隆抗体组的DNA片段形成率分别为(46.2±7.3)%、(80.7士10.3)%,两组比较差异有统计学意义(t=7.952,P<0.01).(4)T细胞和A549细胞共培养上清中分泌的较高含量的IFN-γ[(683.0±66.0)pg/ml],且加入PD-L1单克隆抗体并未进一步上调IFN-γ的分泌[(705.2±79.6)pg/ml],而H1299细胞和CTL共培养上清中IFN-y含量较低[(547.7±50.6)pg/ml],但加入PD-L1单克隆抗体可上调IFN-γ的分泌[(1162.9±136.2)pg/ml],两组比较差异有统计学意义(t=5.431,P<0.05).结论 在肺癌细胞株上表达的PD-L1分子,可降低CTL对肺癌细胞的杀伤效应.
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