水通道蛋白1对内皮祖细胞迁移功能的影响

目的 观察水通道蛋白1(AQP1)对内皮祖细胞(EPC)增殖迁移功能的影响.方法 体外分离AQP1野生型(WT)(n=6)和敲除型(KO)小鼠(n=6)骨髓细胞并定向培养分化为EPC.应用免疫荧光法检测细胞表面抗原鉴定EPC,通过无标记活细胞动态分析技术、细胞Transwell迁移实验及划痕实验比较AQP1 WT和KO小鼠中EPC的功能差异.结果 对小鼠EPC培养观察发现,细胞最初保持悬浮状态,7 d内逐渐黏附贴壁成典型的间充质干细胞,间充质干细胞经内皮细胞专用培养基培养7 d后逐渐分化贴壁,14 d后细胞继续增殖,形态为梭形或多边形,并融合成铺路石样的EPC细胞.细胞表面标志鉴定发现,应用内皮细胞专用培养基培养7 d后细胞CD133及CD31表达阳性,随着培养时间的延长在14 d时CD34及Flk-1表达阳性.免疫荧光法验证结果显示,AQP1仅在AQP1 WT小鼠的EPC中表达阳性.对不同AQP1状态下EPC的功能研究结果显示,培养72 h的AQP1 WT小鼠与KO小鼠EPC细胞增殖数目无显著差异.Transwell检测结果显示,AQP1 KO小鼠其EPC迁移能力较WT小鼠明显减弱.细胞划痕实验检测结果显示,AQP1 KO小鼠EPC的划痕愈合能力也明显低于WT小鼠.结论EPC最初表现出干细胞特征,随着培养时间延长,逐渐表现出内皮细胞特征.AQP1可影响EPC的迁移能力而非增殖能力.