环境雌激素双酚A暴露干扰仔鼠卵巢发育的研究

双酚A(bisphenol A,BPA)是一种无处不在的环境雌激素.为探究小鼠(Mus musculus)孕期和哺乳期连续暴露BPA对子代卵巢发育的影响,.本研究将8周龄孕0 d母鼠随机分为7组,每组20只,分别通过饮水给予蒸馏水和0.05、0.5、5、10、20和50 mg/kg BPA.从母鼠孕0 d开始直到仔鼠21 d断奶,仔鼠并未直接接触BPA,而是通过孕期胎盘传递和哺乳期乳汁传递间接接触BPA,小鼠均于孕20 d分娩,故仔鼠间接接触BPA时间为41 d.结果显示,母鼠染毒BPA剂量≥20 mg/kg时,仔鼠血清和卵巢中BPA含量显著增加(P<0.05).器官指数测定结果显示,染毒BPA剂量≥10 mg/kg可使仔鼠卵巢指数显著增大(P<0.05).苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)病理组织切片的观察结果则证明,极低剂量BPA(≥0.05 mg/kg)即可使仔鼠卵巢产生损伤,卵泡颗粒细胞层出现破损.细胞凋亡原位末端转移酶标记技术(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling assay,TUNEL)实验结果显示,母鼠染毒BPA≥20 mg/kg时卵巢颗粒细胞发生细胞凋亡(P<0.05).免疫组化结果显示,母鼠染毒BPA剂量≥20 mg/kg时仔鼠卵巢雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)表达量显著增多(P<0.05);而母鼠染毒BPA剂量为50 mg/kg时其子代雌鼠卵巢ERβ表达量显著升高.转录组测序结果显示,母鼠染毒BPA后仔鼠卵巢相较于空白对照组核糖体通路发生变化,其中核糖体蛋白L3(ribosomal protein L3,Rpl3)、Rpl21、Rpsa基因表达显著下调、Rps2、Rps28、Rpl26、Rpl32和Rpl10a基因表达显著上调.这些基因分别与胚胎生殖系统发育受阻、细胞凋亡和卵巢早熟等相关.荧光定量PCR验证了转录组结果.本研究证实了BPA的生殖毒性,在基因层面揭示了核糖体功能蛋白合成异常与BPA的生殖毒性有关,且低剂量BPA抑制核糖体蛋白表达而高剂量BPA促进核糖体蛋白表达,证明了BPA在扰乱卵巢发育的两面性,即低剂量抑制卵巢发育,高剂量促进卵巢发育.使用剂量的不同或许是目前关于BPA研究结果产生矛盾的原因.本研究中,子代小鼠并未直接接触BPA,但仔鼠卵巢的发育依然受到了BPA的影响,并进一步证实了BPA通过影响卵巢核糖体功能扰乱卵巢正常发育.本研究结果意味着家畜使用含BPA的塑料制品可能会影响后代卵巢发育,因此在家畜养殖中避免使用含BPA塑料制品将有助于保证后代生殖健康,提高畜家畜殖效益.