光谱法与共焦荧光成像法研究罗丹明B与ct-DNA的相互作用

采用吸收光谱、荧光光谱以及共焦荧光成像技术研究生理条件下罗丹明B(Rhodamine B,RB)与小牛胸腺DNA(ct-DNA)的相互作用以及相互作用模式.光谱研究结果显示,在450 ～650 nm的吸收光谱范围内,ct-DNA溶液对罗丹明B有减色作用;在560～ 660 nm荧光发射光谱范围内,ct-DNA对罗丹明B有荧光猝灭作用.同时,随着ct-DNA的加入,罗丹明B溶液的荧光偏振值发生变化,说明罗丹明B与ct-DNA能发生相互作用.在竞争性实验中,罗丹明B未能将亚甲基蓝(MB)从MB-ct-DNA复合体系中置换出来,说明罗丹明B与ct-DNA通过沟槽结合方式发生相互作用.共焦荧光成像结果显示,ct-DNA加入后,罗丹明B的荧光猝灭十分明显.利用罗丹明B和4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)对HeLa细胞染色后进行共焦荧光成像,结果进一步证实罗丹明B与ct-DNA是通过沟槽结合作用将细胞核染成红色.