黄连解毒汤对UC小鼠的抗炎作用、入血成分测定及其作用靶点的虚拟筛选

考察黄连解毒汤(HLJD)对小鼠溃疡性结肠炎(UC)的作用,测定入血成分以及虚拟筛选入血成分的作用靶点,分析作用机制.将60只Balb/c小鼠随机分成空白组、模型组、美沙拉秦组(0.3 g,kg-1)以及HLJD高、中、低剂量组(24.66,12.33,6.17 g,kg-1).除空白组外,各组小鼠自由饮用2.5％葡聚糖硫酸钠溶液诱导UC,同时HLJD组和美沙拉秦组小鼠灌胃给予相应药物,连续7d.每日观察小鼠,进行疾病活动指数(DAI)评分.实验末,HE染色观察小鼠结肠病理变化,ELISA测定结肠组织中IL-1β,IL-6和TNF-α含量,UPLC-Q-TOF-MS测定入血成分.通过PharmMapper反向对接筛选入血成分的作用靶点,通过TTD,OMIM,GeneCards数据库检索UC疾病靶点,选取成分靶点和疾病靶点的交集作为HLJD治疗UC的作用靶点.利用STRING数据库进行GO和KEGG富集分析.利用Discovery Studio将入血成分与排名靠前的作用靶点进行分子对接.结果 显示,与空白组相比,模型组小鼠DAI显著上升(P＜0.05),镜下可见炎症细胞数量和浸润程度明显增加.与模型组相比,HLJD组小鼠DAI显著降低(P＜0.05),炎症细胞数量和浸润程度减轻.模型组IL-1β,IL-6和TNF-α水平显著升高(P＜0.01),HLJD组炎症因子水平显著降低(P＜0.05).经UPLC-Q-TOF-MS鉴定10个入血成分.网络药理学分析结果显示,作用靶点主要富集在对有机物、化学物质、含氧化合物的反应等129条生物过程,以及IL-17,TNF,hepatitis B等16条信号通路.分子对接结果显示,黄柏内酯、巴马汀和小檗碱可通过氢键等形式与CASP3和MMP9靶点结合.综上所述,HLJD可减轻DSS诱导的UC小鼠结肠黏膜炎症浸润和黏膜损伤,其作用机制可能与黄柏内酯、巴马汀和小檗碱等入血成分作用于CASP3,MMP9等靶点,进而调控IL-17,TNF等信号通路有关,最终可降低结肠组织IL-1β,IL-6和TNF-α水平发挥抗炎作用.