miR-300通过负向调控垂体肿瘤转化基因1抑制骨肉瘤细胞MG63的侵袭和转移

目的 研究miR-300及垂体肿瘤转化基因1(PTTG1)对骨肉瘤侵袭转移的影响,探讨引起骨肉瘤侵袭转移的分子机制.方法 Western blot检测人成骨细胞hFOB1.19及骨肉瘤细胞MG63中PTTG1的表达情况,并检测转染敲低PTTG1质粒后细胞的转染效率;Transwell侵袭实验和CCK8实验检测敲低PTTG1及过表达miR-300对骨肉瘤细胞MG63侵袭和增殖能力的影响;网上预测并筛选与PTTG1互补结合的microRNAs(miRNAs);qRT-PCR检测人成骨细胞hFOB1.19及骨肉瘤细胞MG63中miR-300的表达情况;Western blot检测转染过表达miR-300质粒后PTTG1在骨肉瘤细胞MG63的表达情况;双荧光素酶实验检测miR-300和PTTG1的靶向结合情况;Transwell侵袭实验和CCK8实验检测过表达miR-300和过表达PTTG1质粒共转后对骨肉瘤细胞MG63侵袭和增殖能力的影响.结果 PTTG1在骨肉瘤细胞MG63中表达较高(P=0.0002);敲低PTTG1可抑制骨肉瘤细胞MG63的侵袭(P=0.0002)和增殖(P=0.0039)能力;网上预测软件预测可能与PTTG1互补结合的miRNAs,NCBI数据库下载数据集分析确定研究对象为miR-300;qRT-PCR结果 表明miR-300在骨肉瘤细胞MG63中表达降低(P=0.0004);采用过表达质粒过表达骨肉瘤细胞MG63中的miR-300,qRT-PCR结果 提示转染成功(P<0.0001);Western blot发现过表达miR-300后PTTG1的表达明显降低(P=0.0007);双荧光素酶实验结果 显示miR-300可与PTTG1靶向结合(P=0.0010);细胞共转实验显示过表达PTTG1可逆转miR-300对骨肉瘤细胞侵袭(P=0.0003)和增殖(P=0.0077)能力的影响.结论 miR-300通过靶向结合PTTG1抑制骨肉瘤细胞MG63的侵袭转移能力.