PCV2-PRV-PRRSV-CSFV多重PCR检测方法的建立

根据GenBank中已发表的猪圆环病毒2型(PCV2)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)的有关基因序列,设计4对引物分别用于扩增PCV2的ORF2基因、PRV的gH基因、PRRSV的ORF7基因和CSFV的5'UTR基因的目的片段,建立了同时检测4种病毒的多重PCR.敏感性和特异性试验结果表明,该方法对这4种病毒的最低核酸检出量分别为48.1 pg(PCV2)、29.6pg(PRV)、54.2 pg(PRRSV)和62.8 pg(CSFV).该方法可同时扩增440 bp(PCV2)、359 bp(PRV)、321 bp(PRRSV)和186 bp(CSFV)的特异性片段,而对牛流行性腹泻病毒、猪流行性腹泻病毒和猪细小病毒的检测结果均为阴性.多重PCR与单一PCR的符合率为100％.结果表明,该方法可用于这4种病毒的临床快速检测与流行病学调查.