hi FGF2真核表达载体的构建及其高表达对细胞凋亡的影响

Zhong-lin CHEN,Hong-yan JIANG,Xiao-bing HONG,Zhong-hua CHEN,Yan-shan ZHENG,Han XU,Gang-gang SHI,Zhan-qin HUANG

Chinese Pharmacological Bulletin（2014）

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摘要

目的构建hi FGF2（high molecular weight isoform fibroblast growth factor-2,hi FGF2）真核表达载体,并观察其过表达后对细胞凋亡的影响。方法设计合成hi FGF2 cDNA模板引物,Nhel和Hind III双酶切pDsRed1-N1质粒,T4DNA连接酶重组hi FGF2质粒,PCR扩增目的基因,琼脂糖凝胶电泳检测及测序鉴定。将重组hi FGF2质粒瞬时转染HEK293细胞,荧光倒置显微镜检测转染效率。AnnexinV-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 hi FGF2真核表达载体符合设计要求,瞬时转染HEK293细胞的转染率达70%以上。过表达hi FGF2,HEK293细胞FITC/PI双染阳性率达（29.12±2.81）%,与正常组、转染空载体组差别有显著性（P<0.01或P<0.05）。结论成功构建hi FGF2真核表达载体,过表达hi FGF2导致细胞凋亡。

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关键词

Hi FGF2,eukaryotic expression vector,transfection,apoptosis,HEK293 cells,flow cytometry

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