大肠不耐热肠毒素B亚单位佐剂活性相关蛋白的筛选

目的：通过对大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位相互作用蛋白的分析，探讨LTB佐剂活性的分子机制。方法纯化的LTB蛋白和生理盐水分别处理RAW 264．7细胞，pull-down实验分离与LTB有相互作用的蛋白分子，质谱鉴定这些相互作用蛋白；免疫荧光和Western blot分析验证与LTB相互作用蛋白在细胞内的相互作用。结果通过质谱鉴定了25种可能与LTB存在相互作用的蛋白分子，并构建了其相互作用网络图，筛选出可能与LTB免疫调节作用相关的蛋白分子；免疫荧光结果显示神经节苷脂能阻断LTB进入RAW 264.7细胞内，LTB在细胞内与GM130存在相互作用，而Vimentin在生理状态下与LTB 不存在相互作用；LTB 处理RAW 264.7细胞12 h后，β-actin表达上调，Hspd1表达无变化。结论 LTB佐剂活性的发挥是通过与免疫细胞表面GM1结合，引起内吞，并以小泡的形式到达高尔基体，通过高尔基体的加工。最终通过与 Jup 结合进而作用于 TCF／LEF，引起Bcl-2、IL-6、Runx3等基因表达的变化，发挥促进T细胞和B细胞的增殖分化及活化、分泌细胞因子及免疫球蛋白的作用。