鬼臼毒素诱导离体大鼠附睾上皮细胞凋亡机制研究

Guo-ting LI,Rui-hua ZHONG,Jie-yun ZHOU,Shu-wu XIE,Ping CHEN,Yue-ying QIAN, Yan ZHU

Chinese Pharmacological Bulletin（2017）

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摘要

目的探讨鬼臼毒素（podophyllotoxin,PPT）抑制SD大鼠附睾上皮细胞增殖作用,揭示其诱导凋亡的相关分子机制。方法体外培养大鼠原代附睾上皮细胞,CCK-8法检测鬼臼毒素作用24、48、72 h后对细胞增殖的影响;透射电镜观察细胞内部结构变化;Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡率;原位末端标记法（TUNEL）观察细胞凋亡形态;RT-PCR技术研究TNF-αmRNA的变化;ELISA法检测鬼臼毒素对细胞培养上清液TNF-α水平的影响;Western blot法检测细胞色素C、caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白的表达水平。结果CCK-8结果显示,鬼臼毒素能明显抑制大鼠附睾上皮细胞增殖并诱导凋亡,并呈剂量及时间依赖性（P<0.05）,24、48、72 h的半数抑制浓度（95%置信区间）分别为59.36（15.50²27.41）、0.37（0.080¹.70）、0.077（0.017⁰.35）μmol·L^-1;透射电镜下观察发现,鬼臼毒素引起附睾上皮细胞形态变圆,细胞核破碎,线粒体空泡化;RT-PCR和ELISA检测结果显示,鬼臼毒素能升高TNF-αmRNA水平及细胞培养上清中TNF-α的含量;Western blot结果显示,鬼臼毒素能明显增加细胞中细胞色素C、caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白表达。结论鬼臼毒素可通过线粒体调控的内源性通路和TNF受体介导的外源性通路,诱导大鼠附睾上皮细胞发生凋亡。

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关键词

podophyllotoxin,fertility,rat epididymal epithelial cell,cell apoptosis,mitochondria,TNF-α,caspase activation

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