基于cAMP/PKA通路研究当归芍药散提取液对阿霉素诱导IMCD3细胞损伤的保护作用
Chinese Pharmacological Bulletin（2019）
摘要
目的观察当归芍药散（Danggui-Shaoyao-San,DSS）提取液对阿霉素（adramycin,ADR）诱导损伤的内髓集合管（inner medullary collecting duct cell,IMCD3）细胞Na+,K+-ATP酶、环磷酸腺苷（cAMP）、蛋白激酶A（PKA）、cAMP反应元件结合蛋白（CREB）及水通道蛋白-2 （aquaporin 2,AQP2）的影响,从水液平衡的角度探讨其相关的保护机制。方法以IMCD3细胞为研究对象,MTT法观察不同浓度ADR对IMCD3细胞增殖的影响;将细胞分为正常组、模型组、DSS提取液低、中、高剂量组(0.8、1.6、3.2 g·L-1)、H-89抑制剂组;ELISA法检测细胞cAMP含量;试剂盒检测Na+,K+-ATP酶活性变化;Real-time PCR法检测PKA、CREB、水通道蛋白2（AQP2）mRNA表达;Western blot法检测Na+,K+-ATP酶、PKA、CREB、AQP2蛋白表达。结果 ADR对IMCD3细胞的损伤最适浓度为1×10-8 mol·L-1;不同浓度的DSS提取液均可有效抑制ADR诱导IMCD3细胞损伤,提高Na+,K+-ATP酶活性及细胞上清cAMP含量（P<0.05）,DSS(1.6、3.2 g·L-1)可上调PKA、CREB、AQP2 mRNA及蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。结论 DSS提取液对ADR诱导IMCD3细胞损伤模型具有一定的保护作用,与提高Na+,K+-ATP酶活性、激活cAMP-PKA-CREB通路有关。
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