核转录因子-κB/β-连环蛋白信号通路介导肠产毒性大肠杆菌引致IPEC-J2细胞损伤
Chinese Journal Of Animal Nutrition（2020）
摘要
本试验旨在探讨肠产毒性大肠杆菌（ETEC）造成IPEC-J2细胞损伤的分子机制。ETEC K88感染、核转录因子-κB（NF-κB）抑制剂处理IPEC-J2细胞以及小干扰RNA（siRNA）沉默IPEC-J2细胞中β-连环蛋白（β-catenin）基因的表达后,采用定量PCR（qPCR）法检测细胞中NF-κB、闭锁小带蛋白-1（ZO-1）、闭锁蛋白（occludin）、Toll样受体2（TLR2）、Toll样受体4（TLR4）、β-连环蛋白（β-catenin）、细胞周期蛋白D1 （cyclin D1）和人髓细胞增生原癌基因（c-Myc）的mRNA表达量,用Western blotting法检测细胞中ZO-1、occludin的蛋白表达量和p65NF-κB的磷酸化水平,用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-8（IL-8）含量和乳酸脱氢酶（LDH）活性。结果表明:ETEC K88作用细胞6或24 h时,ZO-1和occludin的蛋白表达量以及β-catenin和c-Myc的mRNA表达量均极显著降低（P<0.01）,TNF-α、IL-8含量和LDH活性显著上升（P<0.05）,p65 NF-κB的磷酸化水平在ETEC K88作用细胞1、3和6 h时均极显著上升（P <0.01）,TLR2、TLR4的mRNA表达量在ETEC K88作用细胞6和12 h时均极显著上升（P<0.01）。NF-κB被抑制后,TNF-α、IL-8和LDH的活性均极显著降低（P<0.01）,ZO-1和occludin的蛋白表达量以及NF-κB的mRNA表达量均极显著升高（P <0.01）。siRNA沉默β-catenin基因后,各时间点β-catenin、 cyclin D1和c-Myc的mRNA表达量均极显著降低（P<0.01）,LDH的活性显著上升（P<0.05）。综上所述,ETEC K88通过上调NF-κB信号通路引起炎症反应,下调β-catenin信号通路活化抑制IPEC-J2细胞的增殖,从而诱导IPEC-J2细胞损伤。
更多关键词
ETEC K88,IPEC-J2细胞,NF-κB信号通路,β-catenin信号通路,
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