蓝舌病病毒10型和20型及23型多重RT-PCR检测方法的建立

为建立可同时鉴别检测蓝舌病病毒(BTV)10型、20型及23型的方法,本研究针对这三型病毒VP2基因保守区,设计合成了3对特异性引物,经过条件优化,建立了单管同时鉴别BTV 10型、20型、23型的多重RT-PCR方法.结果显示,该方法可同时扩增出BTV10型696bp、BTV20型293bp和BTV23型356bp三条特异性的片段,对BTV其他基因型以及小反刍兽疫病毒(PPRV)、口蹄疫病毒(FMDV)的核酸均无扩增;该方法最低可检测1.696×103copies/μL的BTV10、1.375×103 copies/μL的BTV20和1.317×103 copies/μL的BTV23.利用建立的多重RT-PCR方法对67份临床样品进行检测,结果与OIE推荐的BTV套式RT-PCR方法符合率为100％.本研究建立的多重RT-PCR检测方法特异性好,具有较强的检测敏感性,可用于蓝舌病病毒血清型的鉴别.