辣椒疫霉PcCRN20-C蛋白的表达纯化及结晶
China Biotechnology（2020）
Abstract
CRN(crinkling and necrosis-inducing protein)为疫霉菌在与寄主互作过程中分泌的一类特有胞质效应因子,干扰寄主细胞正常的生理代谢和功能.采用PCR法从辣椒疫霉LT1534菌株cDNA中克隆PcCRN20-C基因.该基因序列长783bp,编码261个氨基酸.构建重组表达载体,并转化大肠杆菌BL21(DE3).在优化条件下诱导表达重组蛋白,利用Ni-NTA金属螯合层析、离子交换层析、分子筛层析和胰蛋白酶酶解技术获得高纯目的蛋白,SDS-PAGE分析表明,蛋白质分子量约为25kDa.采用座滴气相扩散法进行晶体制备和筛选,成功获得了蛋白质晶体,并通过X-射线衍射仪收集了晶体衍射花样.结合蛋白质晶体学方法,获得了有衍射的辣椒疫霉PcCRN20-C蛋白晶体,为进一步研究CRN蛋白的结构与病原菌致病机制提供参考资料.
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phytophthora capsici,crystallization,purification
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