健康成人24h尿液细胞外囊泡定量及大小分布

目的 研究观察健康成人24h尿液细胞外囊泡(uEVs)数量、大小分布及个体间差异.方法 利用液压透析滤过法分离9名健康成年人24h uEVs,通过western blot(WB)和透射电镜(TEM)技术验证uEVs的分离效果,应用BCA蛋白定量法及纳米微粒跟踪分析技术分别对富集的uEVs样品进行蛋白定量测定和囊泡数量及大小分布的分析.结果 TEM下可见大小不等、形状不一的囊泡.WB技术检测到外泌体的标记物—人肿瘤易感基因(TSG101).9名健康成人24h尿液分离的uEVs样品蛋白定量范围为132.50～760.70ng/mL.纳米微粒跟踪分析技术检测结果显示24h uEVs数量为(3.56～5.12)×1012个,CV=14.23％.24h分泌的uEVs中,直径在＜40nm范围内的囊泡占所检测到的总囊泡数的0.04～0.69％,数量为(1.80～26.49)×109个;符合外泌体直径范围(40～100nm)的囊泡占总囊泡数的22.07％～42.08％,数量为(1.00～1.77)×1012个.符合微囊泡直径范围(100～1000nm)的囊泡约占总囊泡数的57.88％～77.85％,数量为(2.09～3.86)×1012个.结论 新型液压透析滤过法能高效、便捷地实现大样本尿液uEVs的分离.健康成人分泌的24h uEVs个体间差异较小,是uEVs相关研究较理想的标本来源.