一氧化氮对大鼠肠神经干细胞增殖与分化的影响

目的 通过增加外源性一氧化氮或减少内源性一氧化氮,观察一氧化氮对大鼠肠神经干细胞(ENSCs)增殖与分化的影响.方法 从孕15d胚鼠肠道提取肠神经干细胞,传代后肠神经干细胞分为DETA/NO 50 μ.mol/L组、L-NAME 100μmol/L组、DETA/NO50 μmol/L+L-NAME100 μmol/L组及空白对照组继续培养.培养48 h后,硝酸盐还原酶法检测各组培养液中一氧化氮浓度；形态学观察各组神经球大小；流式细胞仪检测各组肠神经干细胞Nestin、BrdU标记的增殖细胞、子代细胞神经元Tuj-1染色阳性细胞百分比及各组细胞的凋亡率.结果 与对照组(30.27±18.52)μmol/L相比,传代培养48 h后DETA/NO 50 μmol/L组一氧化氮浓度明显增加(51.94±12.43)μmol/L(P＜0.05)、L-NAME 100 μmol/L组明显减少(16.24±12.25)μmol/L (P＜0.05),DETA/NO 50 μmol/L+ L-NAME100mol/L组无明显差异(38.73±7.95)μmol/L(P＞0.05).形态学发现DETA/NO 50 μmol/L组神经球直径较小,L-NAME 100 μmol/L组神经球直径较大.流式检测发现DETA/NO 50 μmol/L组肠神经干细胞Nestin百分比(16.57±1.45)％明显降低(P＜0.05),BrdU标记的增殖细胞百分比(5.33±0.55)％明显降低(P＜0.05),神经元Tuj-1百分比(25.59±2.78)％明显增加(P＜0.05),而L-NAME 100μmol/L组则效应相反,DETA/NO 50μmol/L+L-NAME 100μmol/L组与对照组无明显差异(P＞0.05).各组细胞凋亡率无显著性差异.结论 DETA/NO在细胞培养液中能分解、释放一氧化氮,可作为合适的外源性一氧化氮的体外供体之一；外源性一氧化氮能抑制肠神经干细胞增殖、促进其向神经元分化,而L-NAME则效应相反.