131I-Trastuzumab对人表皮生长因子受体2过表达乳腺癌细胞的杀伤效应及机制研究

目的 观察131 I-Trastuzumab对人表皮生长因子受体2(HER2)过表达乳腺癌细胞的杀伤效应并探讨其机制.方法 (1)免疫荧光法检测乳腺癌细胞(BT474、MCF-7和HCC1937)表面HER2表达水平.(2) Iodogen法和超滤法制备并纯化131I-Trastuzumab,测定其标记率、放化纯及免疫结合率.(3)细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测不同剂量131I、Trastuzumab和131I-Trastuzumab对HER2过表达乳腺癌BT474细胞的杀伤效应并进行浓度筛选.(4) Western blot检测对照组及各干预组中总Akt及磷酸化Akt (p-Akt)表达水平.统计学分析采用单因素方差分析、析因设计资料的方差分析、Bonferroni校正法及Pearson相关分析.结果 (1)乳腺癌BT474细胞HER2表达水平明显高于MCF-7和HCC1937细胞.(2)131 I-Trastuzumab的标记率、放化纯和免疫结合率分别为(89.71±2.93)％、(91.80±1.43)％和(58.84±3.35)％.(3)131I、Trastuzumab及131I-Trastuzumab对BT474细胞的杀伤效应具有剂量依赖性(r=-0.964、-0.912和-0.618,均P＜0.05);对照组、131I (4.625 GBq/L)、Trastuzumab (125.0 mg/L)及131 I-Trastuzumab(4.625 GBq/L)干预后的BT474细胞存活率分别为(100.00±4.54)％、(64.36±1.51)％、(58.09±4.14)％和(34.73±5.03)％,131I-Trastuzumab干预后的细胞存活率明显低于相应的131I和Trastuzumab干预组(t=10.373和8.180,均P＜0.05).131I、Trastuzumab均可杀伤BT474细胞(F=213.326和313.564,均P＜0.05),两者间存在协同作用(F=9.226,P＜0.05;CDI=0.929).(4) Western blot结果显示对照组、131I、Trastuzumab和131I-Trastuzumab组之间总Akt的表达量差异无统计学意义(F=0.208,P＞0.05);与对照组及131I组相比,Trastuzumab、131I-Trastuzumab组p-Akt含量明显降低(t=12.524、15.984、7.347和10.807,均P＜0.05),而Trastuzumab与131I-Trastu-zumab组之间p-Akt含量差异无统计学意义(t=3.460,P＞0.05).结论 131I-Trastuzumab通过对PI3K/Akt通路的抑制作用增加了细胞的放射敏感性,提高了131I的协同杀伤效能,能较Trastuzumab更有效地杀伤HER2过表达的乳腺癌细胞.