腺病毒介导肝癌抑制基因-1联合5-氟尿嘧啶增强结直肠癌细胞杀伤作用及机制研究

目的 通过化学治疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)联合重组腺病毒(Ad)肝癌抑制基因-1(HCCS1)感染结直肠癌细胞,观察两者对结直肠癌细胞的联合杀伤作用.并初步探讨相关分子机制.方法 RT-PCR和Western印迹法检测Ad-HCCS1感染结直肠癌LoVo细胞后HCCS1的表达.活细胞计数试剂盒(CCK)-8法测定Ad-HCCS1联合5-FU处理时的细胞存活率.流式细胞仪检测各种处理后细胞凋亡的情况.Western印迹法检测各种处理后相关凋亡蛋白的变化.结果 ①Ad-HCCS1可成功介导HCCS1基因在LoVo细胞中的表达.②5-FU+Ad-HCCS1联合作用96 h时,LoVo细胞存活率为(11.23±4.61)%,与对照组比较差异有统计学意义[(92.23±3.77)%,P<0.01].③处理72 h后流式细胞仪分析结果 显示,5-FU+Ad-HCCS1联合组细胞凋亡率为(27.57±1.78)%,高于单用5-Fu组[(8.64±0.94)%]、单用Ad-HCCS1组[(13.19±1.32)%]和5-Fu+空载病毒组[(12.16±1.28)%],差异均有统计学意义(P值均<0.01).④在Ad-HCCS1感染LoVo细胞高表达HCCS1时,胞质蛋白中检测到组织蛋白酶(cathepsin)D;当5-FU加入后,胞质中的抗凋亡蛋白酶前体(procaspase)-8有所减少,而活性BH3结构域凋亡诱导蛋白(Bid)明显增加.在5-FU+Ad-HCCS1处理组,胞质中的Bax水平降低最为明显,而细胞色素C和活性凋亡蛋白酶(caspase)-3表达最多.结论 在5-FU基础上联合Ad-HCCS1可显著增强LoVo细胞的生长抑制和凋亡诱导,两种处理的联合作用点为Bax蛋白,为结直肠癌治疗提供了一种新策略.