金纳米探针结合PCR检测HIV-1 p24抗原的研究

目的 建立以金纳米探针结合终端PCR技术超灵敏检测HIV-1 p24抗原的方法.方法 采用单克隆抗体1G12和1D4建立的夹心ELISA法检测合成的HIV-1 p24抗原.挑选拟南芥基因组中一段47 bp的DNA作为条形码DNA,与5′端修饰巯基的捕获DNA(条形码DNA的互补序列)杂交形成双链DNA.在金纳米粒子表面连接1D4,并与双链DNA通过巯基连接,制成金纳米探针.微孔板上包被1G12,与待检的重组HIV-1 p24抗原及金纳米探针夹心结合.将结合的条形码DNA通过加热解离下来作为检测信号,设计并合成引物进行PCR检测及4％凝胶电泳分析,进而鉴定p24抗原的含量,然后与ELISA法灵敏度进行比较.结果 采用单克隆抗体1G12和1D4建立夹心ELISA法,检测HIV-1 p24抗原最低检测限为1000 pg/ml,采用相同抗体对建立金纳米探针法,通过PCR凝胶电泳法间接检测HIV-1 p24抗原,显示PCR产物电泳条带的强弱与所检测p24抗原含量具有良好的对应关系,最低检测限可达到1 pg/ml.结论 金纳米探针结合PCR凝胶电泳法可以对HIV-1 p24抗原进行检测,与ELISA法比较,其灵敏度可提高3个数量级.