放射联合替莫唑胺治疗对U87-EGFRv Ⅲ细胞及移植瘤影响的实验研究

目的 通过体外、体内实验观察放射联合替莫唑胺治疗对胶质瘤U87-表皮生长因子受体的 Ⅲ型突变体(EGFRv Ⅲ)细胞及其移植瘤的影响. 方法 (1)常规培养人脑胶质瘤U87-EGFRvⅢ细胞,CCK-8实验检测不同浓度的替莫唑胺对U87-EGFRv Ⅲ细胞增殖的影响,计算替莫唑胺的半抑制浓度(IC50);将细胞分为对照组、6Gy放射治疗组、12Gy放射治疗组,分别以0、6、12Gy边缘剂量照射后应用Western blotting实验检测3组细胞侵袭相关蛋白和基因修复相关蛋白的表达;将细胞分为对照组、6Gy放射治疗组、6Gy放射联合替莫唑胺治疗组(经6Gy剂量照射后加入5 mmol/L替莫唑胺),24h后应用Westem blotting实验检测3组细胞侵袭相关蛋白和基因修复相关蛋白的表达;(2)应用对照组、6Gy放射治疗组、6Gy放射联合替莫唑胺治疗组细胞悬液制作裸鼠颅内移植胶质瘤模型,移植后第7、14、21天应用生物发光成像(BLD检测裸鼠体内荧光素酶的表达并测量移植瘤体积,绘制裸鼠的生存曲线、体质量曲线.免疫组化染色检测颅内移植胶质瘤EGFRv Ⅲ、EGFR、基质金属蛋白酶(MMP)-9、血管内皮生长因子(WGF)、Ki67的表达. 结果 (1)替莫唑胺对U87-EGFRvⅢ细胞的IC50为5mmol/L;与对照组比较,6Gy放射治疗组细胞EGFRv Ⅲ、EGFR、MMP-2、MMP-9、VEGF、MGMT、蛋白激酶B(AKT)-1、β-链蛋白(β-catenin)和Ku70蛋白的表达增加,与6Gy放射治疗组比较,12Gy放射治疗组细胞EGFRv Ⅲ、EGFR、MMP-2、MMP-9、VEGF、6-氧-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)、AKT-1、β-catenin和Ku70蛋白的表达降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);与6Gy放射治疗组比较,6Gy放射联合替莫唑胺治疗组细胞EGFRv Ⅲ、EGFR、MMP-2、MMP-9、VEGF、MGMT、AKT-1、β-catenin和Ku70蛋白的表达降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).(2)与对照组、6Gy放射治疗组比较,6Gy放射联合替莫唑胺治疗组细胞的成瘤性低,移植后21d生存率、体质量均较高.裸鼠移植瘤的体积较小,差异有统计学意义(P＜0.05);对照组、6Gy放射治疗组、6 Gy放射联合替莫唑胺治疗组裸鼠肿瘤组织EGFRv Ⅲ、EGFR、MMP-9、VEGF和Ki67的表达依次降低,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 放射联合替莫唑胺治疗可以更好地抑制U87-EGFRvⅢ细胞及其移植瘤的侵袭和增殖能力.